流式细胞仪滤光片应用

　　流式细胞术(FCM)是一种细胞分析仪，用于检测染色细胞标记物的荧光强度。它是一种快速测量和收集细胞物理或化学性质(如大小、内部结构、DNA、RNA、蛋白质、抗原等)的高技术。基于对单细胞的分析和分类。

　　工作原理简介：采用激光作为激发源，保证更好的单色性和激发效率;采用荧光染料和单克隆抗体技术相结合，保证检测的灵敏度和特异性;计算机系统用于在流动的单细胞悬浮液中实现单细胞的多参数信号。数据处理和分析保证了检测速度和统计分析的准确性。

　　流式细胞术主要由五个部分组成：

　　1、流动室和液体流动驱动系统;

　　2、激光光源和光束形成系统;

　　3、光学系统;

　　4、信号检测和存储、显示和分析系统;

　　5、细胞分选系统。

　　其中，激光源和光束形成系统：流式细胞仪可配备一个或多个激光管。常用的激光管是氩离子气体激光管。其发射波长为488nm。此外，还可以配备氦-氖离子气体激光管(波长633nm)和/或紫外线激光管。

　　流式细胞仪检测的主要信号荧光由激发光激发。荧光信号的强度与激发光的强度和辐照时间有关。激光是一种相干光源，它能提供单波长、高强度、高稳定性的光源，是满足这一要求的理想激发光源。

　　激光源和流腔之间有两个圆柱形透镜。激光源发射的圆截面激光束聚焦成截面较小(22微米x 66微米)的椭圆激光束。在这个椭圆激光光斑中，激光能量是正态分布的，因此通过激光探测区的细胞的辐照强度是一对。

　　该光学系统由几组透镜、孔和滤光片组成，可分为两组：流室前部和流室后部，透镜和小孔(通常是两个透镜和一个小孔)的主要功能是将激光源发射的具有圆形截面的激光束聚焦成具有较小截面的椭圆激光束，使激光能量能够正常分布，使细胞通过通过激光可以获得探测区域。流室后面的光学系统主要由几组滤光片组成。滤波器的主要功能是将不同波长的荧光信号发送给不同的光电倍增管。

　　有三种主要类型的滤波器：长波滤波器(LPF)-只允许光通过特定波长，短波通滤波器(SPF)-只允许低于特定波长的光，带通滤波器(BPF)-只允许光通过特定波长，不同的滤波器组合可以将不同波长的荧光信号发送到不同的光电倍增管(PMT)，例如，配置在接收绿色荧光(FITC)的PMT前面的滤波器是在LPF 550和BPF 525的PMT前面配置的接收橙色红色荧光(PE)的滤波器，而在LPF 600和BPF 575前面配置的接收红色荧光(CY5)PMT的滤波器是LPF 650和BPF 675。

　　流式细胞术发明之初，主要用于细胞分类。随着计算机技术、免疫学的发展和单克隆抗体技术的发明，它在细胞动力学分析、细胞凋亡、细胞分类和癌症诊断等生物学、医学和药学领域得到了越来越广泛的应用。有许多领域，如停药，药物疗效分析等。近年来，多功能流式细胞术的发展，多参数分析技术的建立，以及各种功能强大的分析软件的开发，为提高流式细胞仪检测结果的准确性和扩大分析能力提供了保证。